人早幼粒白血病细胞HL60培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人早幼粒白血病细胞HL60

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：IMDM + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：2天换液

备注：请用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接选择我们的ag尊龙凯时完全培养基。

二、细胞收到后处理

接收细胞后，培养至良好状态后应灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议在40x、100x、200x下各拍一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片，默认收到状态良好。（传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖稍微拧松。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，用显微镜观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 发育细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶，待细胞收缩变圆后加5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，须在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（记得佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞贴壁不牢，运输过程中可能会有细胞脱落的现象，这属于正常情况。如脱落较多，请将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟以获取细胞沉淀。沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，待消化1-2分钟后，添加5ml完全培养基终止反应。随后再离心，弃上清，添加1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新培养基至5-8ml/瓶后，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发条件包括：

1. 细胞在运输过程中的问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，符合条件的可重发；
2. 细胞污染问题需要在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
3. 对于常温发货的细胞，静置24小时后及干冰冻存发货的细胞复苏24小时未存活的情况（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰冻存发货及常温发货细胞在未开封的情况下，若出现污染，可重发；
5. 若细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法判断活力，核实后可重发；
6. 细胞收到当天及第2、3天请拍照，若3天内未告知，视为产品合格。4-7天内出现问题并提供前3天照片及相关操作详细步骤的，由技术人员判定责任，符合条件的可重发。

2）细胞出现问题无法重发的情况包括：

1. 客户造成的细胞污染，一般不予重发；
2. 因不正当操作导致细胞状态不良，客户需承担责任，不重发；
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞状态不良，亦不重发；
4. 若细胞状态不良且未提供前3天的照片，不予重发；
5. 在培养期间经其他处理的细胞，不重发；
6. 在收货后2天内未及时反馈，视具体情况而定。

如需进一步信息，请咨询ag尊龙凯时的客服支持，我们将竭诚为您服务！